傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

NCI-H239人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

FJX1： 四連接同源蛋白FJX1抗體 CD24 Others Human 人 CD24 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CL-0408NEC(人食管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 人組織因子(TF)ELISA 試劑盒 Goat Anti-Chicken IgG/AP 堿性0酸酶(AP)標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

G gamma3： G蛋白偶聯(lián)受體γ3抗體 hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞 Human

HUVEC Growth Medium 2single donor Pellet #N/A > 1 mio.cells 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基CM 人組織型纖維溶酶激活物(t-PA)ELISA試劑盒 Goat Anti-Chicken IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

G gamma7： G蛋白偶聯(lián)受體γ7抗體 敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21

RIN-m5f(大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SGC7901(胃腺癌細(xì)胞) 大鼠(FE)ELISA 試劑盒 Alpha1-MG  大鼠α1微球蛋白 96T

Mine adenosyltransferase： 蛋酸腺苷轉(zhuǎn)移酶抗體 人細(xì)胞;Hela S3 [HeLaS3]

LIF Protein Human 重組人 LIF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄肽(CA)ELISA試劑盒 Collagenase II(Mouse Collagenase Type II)  小鼠膠原酶II 96T

phospho-MAPK11(Thr180+Tyr182)： 0酸化原活化的蛋白激酶p38β抗體 CCL21 Others Human 人 CCL21 / 6Ckine 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠調(diào)節(jié)激活正常T-細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RAES)ELISA試劑盒 MDC/CCL22(Human Macrophage-Derived Chemokine)  人巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子 96T

NCI-H239人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞CXCL16 Protein Rat 重組大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(LR)ELISA 試劑盒 MLH1(Mutl homolog l gene) 錯(cuò)配修復(fù)蛋白1抗原 0.5mg

ILT2/CD85j： 細(xì)胞表面樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體 PDHA1 Others Human 人 PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人白細(xì)胞介素4受體(IL-4R)ELISA試劑盒 MUC5AC/Mucin 5AC(Gastric Mucin M1) 胃粘液素抗原 0.5mg

Integrin alpha 2/CD49b： 整合素α2抗體 非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgR;VERO/IgR 大鼠肝癌細(xì)胞，CBRH-7919細(xì)胞 BEL-7405(肝癌細(xì)胞)

LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人白細(xì)胞介素25(IL-25)ELISA試劑盒 MTNR1B/MTNR-1B(Melatonin receptor 1B) 褪黑素受體1B抗原 0.5mg