黃曲霉PCR試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原，樣本中黃曲霉毒素和此抗原競爭黃曲霉毒素抗體，同時黃曲霉毒素抗體與酶標(biāo)二抗相結(jié)合，經(jīng)底物顯色，樣本吸光值與其含有的黃曲霉毒素成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中黃曲霉毒素的含量。
黃曲霉PCR試劑盒的檢測原理：
它是一種固相直接競爭酶聯(lián)分析測定方法。聚苯乙烯微孔板中包被抗黃曲霉毒素的高親和力抗體，這種抗體和黃曲霉毒素的四種亞型都能發(fā)生交叉反應(yīng)。
利用甲醇提取樣品中的黃曲霉毒素，把提取的樣品和HRP標(biāo)記的黃曲霉毒素混勻并加入對應(yīng)的孔檢測。酶標(biāo)記毒素與標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品中黃曲霉毒素競爭與包被在微孔底部的抗體結(jié)合。
孵育一段時間后，倒出孔里的液體，清洗后加入顯色底物，在酶的作用下孔里將會出現(xiàn)藍色。顯色顏色的深淺與結(jié)合物的量成正比例的關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中AFM的量成反比例關(guān)系。所以，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的AFM濃度越高，顯色的藍色將會越淺。加入酸，終止反應(yīng)，底物顏色由藍色變?yōu)樽攸S色。
黃曲霉PCR試劑盒的檢測程序：（注意標(biāo)準(zhǔn)及樣品做平行試驗，可以提高檢測的準(zhǔn)度及度）
1．開始實驗前要求試劑及樣品萃取液達到室溫。
2．取適量的孔條固定在微孔板架上，未使用的孔條，與干燥劑一同放入密封袋中保存。
3．入酶標(biāo)記物到微孔中。
4．入標(biāo)準(zhǔn)品及樣品到相應(yīng)的孔中，注意使用吸頭防止交叉污染
5．入抗體溶液到微孔中，輕微震蕩微孔板。
6．室溫下孵育10分鐘。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注滿蒸餾水，然后到掉，重復(fù)4次，共五次洗板。
8．后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻轉(zhuǎn)微孔板在吸水紙上拍干。
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